Bonjour à tous,
je suis actuellement en deuxième année de thèse en bio mol et je commence à flipper sur une de mes manips que je n'arrive pas à mettre au point. En gros je veux faire des northern et des southern mais mon labo ne possède pas d'autorisation d'utilisation de la radioactivité, beaucoup plus étonnant nous n'avons pas encore de chambre noire...  
Nous nous sommes donc tourné vers l'immunodetection et c'est galère ça ne donne pas grand chose... Nous utilisons le kit DIG High Prime DNA labelling and detection starter kit II de Roche, mais jusque là les essais que nous avons fait sont sans succès : ou bien la sonde s'hybride de partout (serait-ce du à la basse température d'hybridation préconisée par le kit?) ou bien l'hybridation ne se fait que sur le marqueur de taille    
Temps d'hybridation trop court (o. n.) ? pas assez de matériel sur la membrane (6µg) ? spécificité de la sonde ?je ne sais plus quoi changer, si quelqu'un utilise ce kit et a réussi à mettre au point un protocole efficace merci de m'aider un peu..

il faut mettre un peu de chose dans le bidule.

des précisions ? merci quand même !

Y a un topic Bio mol et génétique dans la partie sciences, avec plein de "gens compétents"

Salut
ça devrait marcher très bien avec l'immunodétection. est-ce que tu as vérifié avec un autre kit que ton matos marche? (style le champ éléctrique fonctionne?)

On dirait un nom à rallonge pour pièce automobile qui permet de gagner de nombreux chevaux
 
Le suel truc que j'ai pigé c'est DNA la dedans

pareil.
mais je vois pas ce que la soeur de lio vient foutre dans l'histoire...

faut changer les piles  
ca m' est encore arrivé ce matin ...